HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题

1）为什么要进行衍生化？ 衍生化的目的是将原本无法直接检测的组分转化为可被检测器检测的物质，使被测组分与衍生化试剂有选择性地参与反应，并改变被测组分在色谱柱中的出峰次序，从而实现更好的分离效果。

2）衍生化的分类？ 根据发生衍生化的时机，化学衍生法可分为柱前衍生法（pre-column derivatization）和柱后衍生法（post-column derivatization）两种。柱前衍生法在进样前通过衍生化反应将样品转化为衍生化产物，然后再经过色谱柱进行分离。柱后衍生法则是在色谱柱之后，通过衍生反应改变被测物的物理或化学性质，使其能够被检测到。

3）适用于衍生化的化合物有哪些？ 衍生化适用于多种化合物，包括有机化合物、天然产物、生物大分子（如蛋白质、核酸等）、环境样品、食品成分、药物和药物代谢产物等。

4）进行衍生化的要求有哪些？ 进行衍生化的要求包括选择适当的衍生化试剂和反应条件，确保衍生化反应的选择性和效果。此外，还需注意避免产生多种衍生化产物，以免给色谱分离带来困难。

5）柱前衍生和柱后衍生的缺点是什么？ 柱前衍生的缺点是当样品经过衍生化反应后，可能会产生多种衍生化产物，导致分离困难。另外，柱前衍生允许较长的反应时间和各种形式的反应器，但需要更多的处理步骤和耗时。 柱后衍生的缺点是需要开发特定的柱后衍生系统，涉及性能、价格和外形等方面的标准。此外，柱后衍生可能会增加仪器的复杂性，并且需要在柱后衍生前后进行色谱检测器的适配。

色谱仪的柱前衍生和柱后衍生
色谱仪的衍生化主要是为了提高目的物的可检测性。对于气相色谱，主要是为了增强目的物的挥发性或改善目的物的极性。对于液相色谱仪，主要是为了提高检测器对目的物的响应。

一、衍生化分类：

1、柱前衍生：在分析物经过色谱柱前与衍生剂反应，反应产物在色谱柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物。

2、柱后衍生：分析物在色谱柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，检测的是衍生产物。

二、适用的化合物：

生物酸、生物碱、胺类、抗生素和氨基酸类等。

三、衍生化要求：

1、衍生剂必须过量且稳定。衍生剂不过量，反应不完全，检测不充分。衍生剂不稳定，重现性差。

2、衍生剂、衍生产物和衍生副产物容易分离。只能检测到衍生产物。

3、衍生反应快速、完全。

四、柱前衍生特点：

1、优点：

（1）相对自由地选择反应条件。

（2）不存在反应动力学的限制。

（3）衍生副产物可进行预处理。

（4）容易允许多步反应的进行。

（5）有较多的衍生剂可选择。

（6）不需要复杂的仪器设备。

2、缺点：

（1）形成的衍生副产物可能对色谱分离造成较大困难。

（2）在衍生化过程中，容易引入杂质，或损失样品。

五、柱后衍生特点：

1、优点：

（1）重现性好，影响因素少，引入物质比较少。

（2）分析物可以在其原有的形式下进行分离，容易选用已有的分析方法。

2、缺点：

（1）对于一定的溶剂和有限的反应时间来说，目前只有有限的反应可供选择。

（2）可能有扩散问题。

（3）需要额外的仪器设备。