液相色谱仪柱后衍生荧光检测法测定肉制品中甲萘威残留量
液相色谱仪柱后衍生荧光检测法是一种适用于测定肉制品中甲萘威残留量的有效方法。它具有高效、灵敏和可靠的特点，可以广泛应用于食品检测和质量控制领域。
液相色谱仪柱后衍生荧光检测法是一种高效、灵敏和可靠的方法，用于测定肉制品中甲萘威残留量。该方法基于液相色谱技术，通过柱后衍生反应将甲萘威转化为具有荧光性质的物质，然后利用荧光检测器进行检测。
首先，将肉制品样品进行预处理，提取出其中的甲萘威残留物。然后将提取液进行净化处理，去除杂质，得到纯净的甲萘威溶液。接下来，将甲萘威溶液注入液相色谱仪中，通过色谱柱进行分离。在分离过程中，甲萘威在色谱柱中被洗脱，并与其他杂质分离。
随后，将分离后的甲萘威溶液流经柱后衍生反应器，与适当的衍生试剂进行反应。在反应过程中，甲萘威被转化为具有荧光性质的物质。这种荧光物质可以很容易地被荧光检测器检测到。
最后，通过液相色谱仪的软件系统对检测到的荧光信号进行处理和分析。根据荧光信号的强度，可以计算出甲萘威的残留量。
该方法具有以下优点：首先，它采用了液相色谱技术，可以对复杂的样品进行高效分离和净化，从而提高测定的准确性和可靠性。其次，通过柱后衍生反应将甲萘威转化为荧光物质，提高了检测的灵敏度。最后，利用荧光检测器进行检测，可以避免干扰物质的干扰，提高检测的准确性。
总之，液相色谱仪柱后衍生荧光检测法是一种适用于测定肉制品中甲萘威残留量的有效方法。它具有高效、灵敏和可靠的特点，可以广泛应用于食品检测和质量控制领域。
一、液相色谱仪柱后衍生荧光检测法测定肉制品中甲萘威残留量的原理：
用丙酮-石油醚混合溶液提取样品中的甲萘威残留物，经凝胶层析柱净化后，浓缩，高效液相色谱仪分离，经柱后衍生后，用荧光检测器检测，外标法定量。
二、试剂和溶液配制：
1、试剂和材料：
1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。
1.2 乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯。
1.3 环己烷（C6H12）:色谱纯。
1.4 丙酮（CH3COCH3）：色谱纯。
1.5 石油醚：沸程30℃～60℃。
1.6 无水硫酸钠（Na2SO4）：650℃灼烧4 h，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。
1.7 氯化钠（NaCl）。
1.8 柱后衍生试剂。
1.9 邻苯二甲醛（C8H602，O-Phthaladehyde,OPA）。
1.10 巯基乙醇（C2H6OS，Thiofluor）。
2、溶液配制：
2.1 NaOH溶液（0.2%,m/v）：取2 gNaOH，以水定容至1000 mL。
2.2 邻苯二甲醛稀释液：硼砂溶液（0.4%, m/v）。
2.3 邻苯二甲醛试液：溶剂储罐中注入 945 ml OPA 稀释剂，用惰性气体(氮气 )吹扫至少 10 min， 100 mg OPA 固体溶解于约 10 mL 的色谱纯甲醇中，将 OPA 溶液加入除氧的 OPA 稀释剂中，溶解 2 g 巯 基乙醇固体于 5mL OPA 稀释剂中，加入到储罐中，盖上瓶盖，打开气流，再不断的吹扫几分钟，关闭排 气阀，轻轻地搅动溶剂以使其完全混合。
2.4 乙酸乙酯-环己烷混合溶液（1+1,v/v）：取100 mL乙酸乙酯，加入100 mL环己烷，摇匀备用。
3、标准品溶液配制：
3.1 甲萘威：分子式 C12H11NO2，CAS 63-25-2，纯度>99.5 %。
3.2 甲萘威标准储备液：准确称取适量的甲奈威标准品，以乙腈溶解，4℃冰箱保存，有效期为6个 月。保存于4℃冰箱内。
3.3 甲萘威标准工作液：取一定量的标准储备液，用乙腈稀释至适当浓度，4℃冰箱保存，有效期为 1周。保存于4℃冰箱内。
三、仪器设备：
1、液相色谱仪：配有荧光检测器和柱后衍生单元。
2、分析天平：感量 0.01 g 和 0.0001 g。
3、全自动凝胶色谱仪（配有馏分收集浓缩器）。
4、旋转蒸发装置。
5、氮吹仪。
6、组织匀浆机。
7、振荡器
四、试样制备：
1、试样制备：
1.1 肉 将所取全部样品，充分搅碎混匀，取有代表性的样品，总量不少于500 g，装入清洁容器内，密封 并标明标记。
1.2 罐头 将所取全部样品整罐倒出，充分搅碎混匀，取有代表性的样品，总量不少于500 g，装入清洁容器 密封并标明标记。
2、试样保存：试样应于-18℃以下保存。在抽样和制样的操作中，应防止样品受到污染或发生含量的变化，以保证实验样品能代表总体样本。
五、分析步骤：
1、提取：
称取试样 20 g（精确到 0.01 g）,于 100 mL 具塞三角瓶中，加水 6 mL（视样品水分含量加水使总 水量约 20 g，肉通常在 70%左右，加水 6 mL），加 40 mL 丙酮，匀浆 1 min,加氯化钠 6 g，充分摇匀， 再加 30 mL 石油醚，振摇 30 min。取 35 mL 有机层上清液，经无水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至 约 1 mL，加 2 mL 乙酸乙酯-环己烷溶液再浓缩，如此重复 3 次。乙酸乙酯-环己烷定容为 5 mL，0.45 μ m 滤膜过滤，待净化。
2、凝胶色谱（GPC）净化：
2.1、凝胶色谱净化参考条件：
a） 净化柱：400 mm×30 mm, Bio Beads S-X3,或相当者。
b） 流动相：乙酸乙酯-环己烷。
c） 流速：5.0 mL/min。
d） 样品定量环：5 mL。
e） 馏分收集段：10.0 min~15.0 min。
f） 净化柱平衡时间：5 min。
2.2、凝胶色谱浓缩参考条件：
a）样品浓缩条件见表 1。
b）浓缩终点判定：液位传感模式。
c）溶剂替换：2 mL 乙腈，重复两次。
d）定容体积：1 mL。
3、测定：
3.1、液相色谱参考条件：
a) 色谱柱：C18，250 mm×4.6 mm×5μm，或相当者；
b) 柱温：42℃；
c) 荧光检测器：λex 330nm，λem 465nm；
d) 流动相：乙腈+水（40+60，体积比）；
e) 流速：1.0 mL/min；
f) 进样量：20 L。
3.2、柱后衍生：
a) 衍生试剂1：水解试剂，0.4%的氢氧化钠溶液，流速0.4 mL/min；
b) 衍生试剂2：OPA 试剂，流速0.4 mL/min；
c) 反应器温度：水解温度为100℃，衍生温度为室温。
3.3、色谱测定：
根据样液中被测甲萘威的含量情况，选定浓度相近的标准工作液，其响应值应在方法检测的线性范 围内。在上述液相色谱条件下，甲萘威保留时间为 11.1 min。
六、结果计算：
